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大鼠肺泡上皮真人投注网站 真人投注平台

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Sciencell研究实验室的大鼠肺泡上皮真人投注网站是从出生2天大鼠的肺组织中分离得到的,原代冻存,冰冻运输。每管真人投注网站密度超过1×10真人投注网站6/ml。该真人投注网站可通过CK-18、CK-19?及波形蛋白特异性抗体的免疫荧光鉴定。该真人投注网站不含支原体、细菌、酵母菌和真菌。如采用ScienCell实验室特制的培养基,可保证此真人投注网站继续增值。然而,由于人肺泡上皮真人投注网站在接种之后会立即转变为I型肺泡上皮真人投注网站且I型肺泡上皮真人投注网站在培养中不会增殖,故不建议该真人投注网站扩增或长期培养。

1、取得完全无血液残留的肺脏:

实验前将大鼠全身血液放净,取得完全无血液残留的肺脏。

2、消化肺组织:

常用于真人投注网站消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮真人投注网站的酶,现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定,有效作用时间短暂,容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮真人投注网站[9]。

胰蛋白酶消化没有选择性,会带来像内皮真人投注网站和间质真人投注网站等一些不能在后面的分离步骤中去除的杂质真人投注网站,因此弹性蛋白酶更有助于提高上皮真人投注网站的纯度和产量。与此相反,Cunningham A C等发现,与弹性蛋白酶相比,用胰蛋白酶可以获得更大产量的Ⅱ型上皮真人投注网站[10]。胶原酶可以用来辅助消化真人投注网站间质。

用几种酶混合的方法比单一酶消化效果更好,但目前还没有文献定量描述最优化的酶消化方法。Finkelstein J N等发现可以通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化,或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。作者在自己的实验中也证实了通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化效果更好。

3、分离纯化真人投注网站:

上皮真人投注网站的分离纯化技术经过二三十年的发展日渐成熟,呈现多样化的特点。目前对真人投注网站的分离纯化主要有以下几种方法:

(1)密度梯度离心:

密度梯度离心分离真人投注网站的原理是不同真人投注网站的沉降系数不同,在密度梯度离心中真人投注网站所处的位置也相应不同。这是最早用于分离Ⅱ型上皮真人投注网站的方法,至今仍在使用。用ficoll或percoll不连续梯度离心,猪肺泡Ⅱ型真人投注网站最终纯度可以达到70%-85%左右[11-12]。沉降系数与真人投注网站的直径和天然密度有关。

由于Ⅱ型真人投注网站与其他真人投注网站存在密度和大小的交叉(如巨噬真人投注网站),仅仅通过离心并不能有效去除杂真人投注网站。Kikkawa(1974)让巨噬真人投注网站吞噬一些重颗粒(如硫酸钡),改变其密度,可以帮助区分巨噬真人投注网站和上皮真人投注网站。离心后的纯度达到94%,但产量明显减少[8]。上皮真人投注网站的大小和密度变化范围较大,用密度梯度离心要丢掉和其他真人投注网站重叠的真人投注网站层,这必然会造成某些密度大的Ⅱ型真人投注网站损失,产量大大降低。

(2)滤膜分离:

滤膜分离的原理是根据真人投注网站的大小不同来进行分离。Ⅱ型上皮真人投注网站约10μm,比巨噬真人投注网站(约25μm)和Ⅰ型真人投注网站(50μm-100μm)小,用150μm孔径的滤膜初滤除去大的组织碎片,30 μm ~40 μm孔径的滤膜除去全部Ⅱ型真人投注网站和部分巨噬真人投注网站[13],采用15μm的滤膜精滤。用滤膜分离操作简单,它和其他分离方法联合使用可以提高纯度。

(3)流式真人投注网站技术:

流式真人投注网站技术分离的原理是根据不同真人投注网站之间的荧光差异。根据不同种真人投注网站的特征识别,用荧光物质标记筛选。上皮真人投注网站内含有丰富的脂类物质,用亲脂性荧光素标记,可以得到纯度很高的真人投注网站。Funkhouser J D等用抗Ⅱ型上皮真人投注网站的单抗进行免疫荧光标记,再用流式真人投注网站仪进行筛选,得到96%的Ⅱ型上皮真人投注网站[14]。但荧光素对被标记真人投注网站有害。Rochat T R等发现自然荧光和直角光散射可以区分巨噬真人投注网站和单核真人投注网站,这给不经荧光标记分离上皮真人投注网站提供了可能[15]。流式技术分离真人投注网站的产量很低,但纯度极高。这种技术经过完善在将来会更有吸引力。

(4)免疫黏附:

免疫黏附的原理是各种真人投注网站的膜表面有不同的免疫活性物质。巨噬真人投注网站和其他大多数非Ⅱ型真人投注网站表面都有IgG上的Fc片段的受体。Uhal(1989)用IgG包被塑料板,把真人投注网站悬液置于板上,巨噬真人投注网站和其他大多数非Ⅱ型真人投注网站因为含有Fc片段的受体而与IgG结合,吸附到板上,不黏附的Ⅱ型真人投注网站被冲洗下来[16]。经过多年的摸索,这种方法近几年已开始应用,简便易行,可除去绝大多数的巨噬真人投注网站,有效的提高上皮真人投注网站的纯度。

(5)贴壁选择:

贴壁选择的原理是各种真人投注网站完成贴壁的时间不同,这种特性用在培养时做筛选。根据最终目的,综合其中几种方法能达到较好的效果。例如先用滤膜过滤,再用IgG包被法。


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