缺氧诱导的真人投注平台circRNA与结直肠癌的研究
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-10-22
缺氧是实体瘤的重要特性之一,低氧癌细胞和相对常氧的癌细胞之间存在转移潜能的差异。环状RNA(circRNA)是一种通过选择性剪接形成的内源性RNA...

    缺氧是实体瘤的重要特性之一,低氧癌细胞和相对常氧的癌细胞之间存在转移潜能的差异。环状RNA(circRNA)是一种通过选择性剪接形成的内源性RNA,可以稳定地富集在真人投注平台中,真人投注平台circRNA(exo-circRNA)是在癌症之间进行信息沟通的媒体。exo-circRNA与结直肠癌的研究值得关注。

技术路线:

结果:
1. 氧气供应的异质性影响细胞膜上E-钙粘着蛋白的分布
    癌细胞大致分为两组,即低氧癌细胞和常氧癌细胞。E-钙粘蛋白(E-cadherin)在结直肠癌(CRC)细胞膜上的分布普遍呈下降趋势,且在常氧癌细胞中比低氧细胞分布少。与缺氧真人投注平台共培养的常氧细胞跨膜的E-cadherin减少,细胞迁移能力增加。表明缺氧性真人投注平台可能确实携带促转移信号至常氧癌细胞。缺氧真人投注平台处理的常氧细胞中GEF-H1 / RhoA的表达增加,下游RhoA活性相应地增加。这些结果揭示低氧真人投注平台刺激的常氧细胞有转移潜能。

2. MiR-133a直接靶向GEF-H1和RhoA
    生物信息学分析GEF-H1 mRNA和RhoA mRNA的3'-UTR均可由miR-133a直接靶向。萤光素酶测定发现miR-133a模拟物降低荧光素酶活性,miR-133a抑制剂增加活性。miR-133a模拟物和抑制剂不影响GEF-H1和RhoA的mRNA含量,改变蛋白水平,证实miR-133a负调控GEF-H1和RhoA的转录后表达。

3. circ-133和miR-133a相互作用
    分离CRC患者和正常人的血浆真人投注平台,检测到真人投注平台标志物Tsg101和CD63。CRC和NC血浆的真人投注平台circRNAs的差异表达,三个circRNA明显上调,其中has_circ_0010522(circ-133)上调丰度最高,并且预期包含至少10个miR-133a结合位点。miR-133a-生物素捕获更多的circ-133,荧光素酶证实circ-133和miR-133a之间的相互作用。CRC患者的血浆真人投注平台中circ-133的表达明显增加,而miR-133a减少。随着肿瘤疾病的发展,circ-133表达逐渐升高,而miR-133a的水平降低。circ-133在CRC组织和细胞系中过表达。来自缺氧细胞真人投注平台富含Circ-133,随着缺氧时间的延长逐渐增加。

4. 缺氧性真人投注平台circ-133孵育正常细胞
    提取的真人投注平台处理在常氧培养中的SW 480和HCT 116细胞,真人投注平台的PKH26染色确认真人投注平台可以成功融入受体细胞。circ-133在低氧真人投注平台培养的细胞中增加,而在低氧si-circ-133真人投注平台处理组减少,GEF-H1mRNA和RhoA mRNA水平几乎保持恒定。低氧真人投注平台处理组中E-cadherin降低,而GEF-H1和RhoA的表达增加。低氧真人投注平台中敲低irc-133,以上变化减弱甚至消失。低氧真人投注平台治疗组RhoA激活增加,低氧si-circ-133真人投注平台中激活受阻。

5. 缺氧性真人投注平台circ-133通过靶向GEF-H1 / RhoA促进肿瘤转移
    细胞用低氧真人投注平台处理,其运动、迁移侵袭能力增强,但消除缺氧性真人投注平台的circ-133后这种现象消失。缺氧性真人投注平台来源的circ-133减少了E-cadherin在细胞膜上的分布。

6. circ-133通过miR-133a / GEF-H1 / RhoA轴促进细胞迁移
    细胞过表达circ-133后运动、迁移侵袭增强,而si-circ-133组减少。细胞中circ-133的水平与E-cadherin膜分布负相关。过表达circ-133细胞中GEF-H1和RhoA上调,E-cadherin减少。以上结果表明,缺氧细胞源性真人投注平台circ-133转入常氧细胞,然后通过吸附miR-133a靶向GEF-H1 / RhoA,从而减少E-cadherin在细胞膜上的分布,增强癌症的迁移能力。

7. 体内实验证实低氧驱动的circ-133 / GEF-H1 / RhoA轴促进肿瘤进展
    HCT116细胞皮下接种到SCID小鼠中,Exosomal-OE.circ-133或Exosomal-KD.circ-133每三天注射一次到尾静脉,检测小鼠体重和肿瘤生长。发现
OE.circ-133和OE.circ-133- KD-GEF-H1小鼠血浆真人投注平台和异种移植组织中circ-133明显增加,而在KD.circ-133组下降。OE.circ-133组和OE.GEF-H1组CTC数明显增加,下调circ-133后CTC数相应减少。OE.circ-133组E-cadherin膜分布减少,circ-133 / GEF-H1 / RhoA轴被抑制分布恢复。总而言之,低氧真人投注平台circ-133可通过GEF-H1 / RhoA轴促进癌症转移。








 


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