MIR106A-5p与真人投注网站进展
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-09-09
调节失调的microRNAs(miRNAs)与肿瘤的进展、转移和预后不良有关。MIR106A-5p在细胞遗传学上定位于Xq26.2,在不同的癌症中作为癌基因和抑癌基因...

    调节失调的microRNAs(miRNAs)与肿瘤的进展、转移和预后不良有关。MIR106A-5p在细胞遗传学上定位于Xq26.2,在不同的癌症中作为癌基因和抑癌基因。然而,MIR106A-5p致癌作用的调控机制尚未阐明。今天小编为大家带来发表于“Autophagy”上的文章:“MIR106A-5p upregulation suppresses autophagy and accelerates malignant phenotype in nasopharyngeal carcinoma”,给大家详细介绍MIR106A-5p如何参与真人投注网站(NPC)进展。

    我们使用miRNA芯片来表征真人投注网站组织中MIR106A-5p的表达水平,通过临床资料确定MIR106A-5p与患者预后的关系,后续实验证实了MIR106A-5p在真人投注网站中调节恶性肿瘤和自噬的机制。最后,我们研究了MIR106A-5p是如何在NPC中上调的。
结果:

1.MIR106A-5p在真人投注网站中的表达及临床意义
    我们使用联合的GEO队列数据库检测NPC miRNAs的表达谱。这些数据表明,在差异表达的miRNAs中,MIR106A-5p在真人投注网站组织中显著增加了4.8倍。qRT-PCR证实了MIR106A-5p在真人投注网站组织中的过表达(图1A)。此外,MIR106A-5p在真人投注网站细胞系中的表达显著增加,尤其是CNE-2和5-8F细胞系(图1B)。其次, ISH显示,临床IV期NPC患者的MIR106A-5p过表达比临床I-III期NPC患者更为突出(图1C,D),这表明MIR106A-5p的失调可能与终末期NPC密切相关。生存率分析表明,MIR106A-5p高表达患者的临床预后比MIR106A-5p低表达的患者差(图1E)。总的来说,这些发现表明真人投注网站进展与MIR106A-5p上调有关。

2.MIR106A-5p加速真人投注网站恶性表型的形成
    我们采用斑马鱼和BALB/c小鼠动物模型检测MIR106A-5p的体内功能。我们发现MIR106A-5p的敲除显著抑制了CNE-2细胞的转移能力(图2A,B)。MIR106A-5p敲除后真人投注网站细胞的迁移减少(图2C,D)。在皮下注射高或低MIR106A-5p表达的CNE-2细胞后测量肿瘤大小,注射MIR106A-5p低表达细胞的小鼠肿瘤生长减少(图2E,F)。这些发现共同提供了MIR106A-5p加速真人投注网站转移和生长的证据。IHC分析显示,低表达MIR106A-5p的异种移植可增加MAP1LC3B的表达水平(图2F,G),MAP1LC3B的表达水平与真人投注网站异种移植瘤中MKI67(增殖标记物ki-67)的表达呈负相关(图2H)。

3.MIR106A-5p抑制真人投注网站细胞自噬
    我们假设MIR106A-5p表达失调可能影响自噬。因此,我们评价了MIR106A-5p对自噬体和自溶体生成的影响。值得注意的是,沉默MIR106A-5p的表达显著促进了ATG基因的表达,并诱导自噬通量产生自噬体和/或自溶体(图3A,I),这表明MIR106A-5p能有效地抑制真人投注网站细胞的自噬。

4.MIR106A-5p通过抑制自噬作用加速真人投注网站恶性表型
    通过评估ATG5基因敲除后细胞的生长和迁移能力,研究了MIR106A-5p抑制的自噬在真人投注网站发生和转移中的作用。敲除ATG5显著降低MIR106A-5p抑制诱导的自噬(图4A)。由于三维细胞培养模型更接近体内肿瘤微环境,因此三维NPC细胞培养被用来评估细胞的活性和增殖。沉默MIR106A-5p表达可减少球体的形成和细胞生存能力,这个表型部分地被抑制ATG5所挽救(图4B)。此外,在ATG5被抑制后,MIR106A-5p海绵体内诱导的转移和生长减少被消除(图4C-E)。这些发现表明MIR106A-5p抑制的自噬加速了恶性真人投注网站的表型(图4F)。

5.BTG3是MIR106A-5p的直接靶点,与头颈部癌预后不良相关
    通过四种常见的生物信息学工具来确定MIR106A-5p的自噬相关靶点(图5A,B)。在这些靶基因中,BTG3具有MIR106A-5p潜在的高亲和力结合位点(图5C)。荧光素酶报告分析显示MIR106A-5p和BTG3 3′-UTR之间具有生物有效相互作用(图5D)。此外,真人投注网站组织中BTG3 mRNA和BTG3蛋白表达降低(图5E)。有趣的是,在MIR106A-5p抑制后,BTG3蛋白水平显著增加,而BTG3的mRNA水平保持不变(图5F-I)。真人投注网站组织芯片中MIR106A-5p表达与BTG3蛋白水平呈负相关(图5J)。这些结果表明MIR106A-5p可能通过翻译抑制来调节BTG3的表达。最后,Kaplan-Meier分析显示,在真人投注网站组织芯片中,低BTG3水平与较差的临床结果相关(图5K)。总的来说,这些数据表明MIR106A-5p通过靶向BTG3直接调节自噬。

6.BTG3对MIR106A-5p抑制自噬是必不可少的
    通过用siRNA转染真人投注网站细胞,我们发现BTG3参与了MIR106A-5p相关的自噬抑制(图6A-E)。一系列分析表明,BTG3的敲除消除了MIR106A-5p抑制增加自噬的能力(图6A-E),证明MIR106A-5p抑制自噬依赖于其降低BTG3水平的能力。

7.BTG3对MIR106A-5p加速恶性真人投注网站表型至关重要
    为了进一步证实MIR106A-5p-BTG3轴导致恶性肿瘤加速,对MIR106A-5p海绵处理的真人投注网站细胞进行慢病毒BTG3 shRNA转导。MIR106A-5p抑制降低了真人投注网站细胞的转移和生长,但这些作用在BTG3基因敲除后显著降低(图7A-E)。IHC分析显示,恶性表型加速的真人投注网站异种移植组的自噬也减少(图7F-K),这表明MIR106A-5p的自噬抑制和促肿瘤作用需要BTG3(图7L)。

8.MIR106A-5p-BTG3轴通过MAPK途径抑制自噬
    接下来,我们试图确定参与MIR106A-5p诱导自噬的BTG3相互作用蛋白。我们对MIR106A-5p靶点进行KEGG途径分析后,确定了MAPK和AKT-MTOR通路。因此,使用这些途径的抑制剂进行拯救实验来研究这些途径对MIR106A-5p-BTG3介导的肿瘤进展的相对贡献。我们发现,只有用PD184352抑制MAP2K1/MEK活性才能显著抑制由MIR106A-5p和BTG3沉默诱导的细胞增殖和迁移;相比之下,MK2206抑制AKT活性未能改变MIR106A-5p-BTG3介导的肿瘤生长和迁移(图8A-D)。此外,我们还检测了真人投注网站的MIR106A-5p-BTG3轴依赖性自噬抑制是否由MAPK信号的激活引起。当MIR106A-5p抑制或BTG3表达激活自噬时,p-MAP2K1和下游p-MAPK1/ERK和p-MTOR水平降低。在用PD184352抑制MAP2K1活性后,MIR106A-5p和BTG3敲除细胞中的p-MAP2K1、p-MAPK1和p-MTOR水平和ATG表达被挽救(图8E),这表明激活的MAPK信号部分负责NPC中MIR106A-5p-BTG3轴抑制自噬。

9.真人投注网站中MIR106A-5p上调是EGR1和SOX9增加反式激活的结果
    我们检查了MIR106A-5p在真人投注网站中是如何上调的。对MIR106A-5p启动子的序列分析确定了EGR1和SOX9分别位于−136和−1472处(图9A),表明EGR1和SOX9调节MIR106A-5p的转录。值得注意的是,在真人投注网站细胞系中,EGR1和SOX9均上调(图9B)。沉默EGR1和SOX9表达降低MIR106A-5p水平,并且EGR1和SOX9的过表达增加了MIR106A-5p水平(图9C-E)。此外,荧光素酶报告分析和染色质免疫沉淀分析表明,EGR1和SOX9都直接与MIR106A-5p启动子的预测结合位点结合,并反式激活MIR106A-5p(图9F-H)。应用IHC和ISH法对真人投注网站组织中SOX9和MIR106A-5p表达的相关性表明,SOX9的表达与MIR106A-5p水平呈正相关(图9I)。真人投注网站生存分析组织微阵列进一步显示,与低表达SOX9的真人投注网站患者相比,SOX9高表达患者的预后较差(图9J)。GEO和TCGA数据库分析也证实了这些预测结果(图9K)。这些结果表明MIR106A-5p在真人投注网站中的过表达是由于EGR1和SOX9增加了反式激活。

结论:
    本研究揭示MIR106A-5p在真人投注网站自噬和促进恶性表型中的作用。在真人投注网站中,MIR106A-5p通过靶向BTG3和激活自噬调节MAPK信号通路促进恶性表型。我们的结果表明MIR106A-5p的定量在治疗前预测复发率和生存率是有用的。综上所述,我们的发现可以为自噬相关真人投注网站治疗的临床应用提供新的见解。


 


我是混淆代码

如果您的浏览器未跳转,请点击此处进行游戏并领取优惠

技术支持 AI智能站群 luis888.vip@gmail.com