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栏目:最新研究动态 发布时间:2020-08-24
CRC(结直肠癌)是一种恶性的实体肿瘤,抑制血管生成(主要通过阻断VEGF(血管内皮生长因子)家族及其相应受体)已被证实可延长包括CRC在内的患者的总体生存期...

        CRC(结直肠癌)是一种恶性的实体肿瘤,抑制血管生成(主要通过阻断VEGF(血管内皮生长因子)家族及其相应受体)已被证实可延长包括CRC在内的患者的总体生存期。VEGFA被认为是最重要的肿瘤细胞分泌促血管生成因子之一。进一步研究CRC中VEGFA异常上调的机制,可能为转移性CRC治疗提供新的策略。
        基因真人投注网站受到一些circRNAs的调控,这些circRNAs充当ceRNAs(竞争性内源性RNA),也被认为是miRNAs的海绵,影响miRNAs的活性。circRNAs阻止miRNAs调控其靶基因。基于以上研究背景,中南大学Chen Chen等人在Journal of Experimental & Clinical Cancer Research杂志(IF=7.06)发表文章探究circRNAs通过调节VEGFA对结直肠癌的影响。

技术路线:

研究结果:
1.选择circ-001971
        文章首先根据以往的文献报道筛选出11个在CRC肿瘤组织中高真人投注网站的circRNAs,然后利用RT-PCR检测这11个circRNAs在肿瘤组织和正常组织中真人投注网站差异最大的,发现有3个circRNAs真人投注网站差异较大,其中circ-001971差异最大。之后,进一步在70个组织样本中检测,发现circ-001971在正常和肿瘤组织中表现出差异。COX回归实验发现circ-001971的真人投注网站与肿瘤分期和淋巴结转移有关,低真人投注网站的circ-001971显示出更高的总体生存率,ROC曲线显示circ-001971具有潜在的诊断和预后能力。

2. circ-001971对CRC细胞增殖、侵袭和HUVEC血管生成的影响
        实验中选择了5中CRC细胞系(HT29, HCT116, LoVo, SW480和 SW620)和正常细胞系FHC,同在组织中的结果一样,circ-001971在肿瘤组织中的真人投注网站比正常组织中多,尤其是HCT116和SW620细胞。之后,筛选出合适的沉默circ-001971的序列并在沉默circ-001971的细胞中检测,发现沉默的细胞中DNA的合成能力、细胞活力和细胞的侵袭都显著降低。最后,收集沉默和对照细胞中的细胞上清,并用来孵育HUVEC细胞,发现circ-001971低真人投注网站降低HUVEC管腔形成能力。

3.在体内实验中,circ-001971对CRC生长的影响
        研究中采用慢病毒敲低circ-001971,6只小鼠平均分为2组,皮下注射SW620细胞转染沉默circ-001971或对照的慢病毒载体,结果显示,circ-001971敲低之后显著降低肿瘤的体积和肿瘤的重量。以上结果表明在体内实验中,circ-001971敲低抑制CRC肿瘤的生长。

4. 选择并验证与circ-001971和CRC血管生成有关的miRNA
        研究显示circRNAs作为miRNA的海绵来减轻miRNA对下游靶基因的抑制。GSE126093和TargetScan预测miR-29c-3p, miR-497-5p, and miR-943靶向circ-001971。之后,为了找到与circ-001971、CRC血管生成有关的miRNA,实验在2种细胞中过真人投注网站3种miRNAs并发现3中miRNAs过真人投注网站时circ-001971和VEGFA的真人投注网站降低并且miR-29c-3p能显著抑制circ-001971的真人投注网站。之后,在细胞中抑制miR-29c-3p,circ-001971真人投注网站上调;抑制circ-001971,miR-29c-3p真人投注网站上调说明两者的相互调节关系。而且,miR-29c-3p过真人投注网站显著降低VEGFA的蛋白水平,miR-29c-3p抑制时升高VEGFA的蛋白水平说明两者的调控关系。

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5. MiRNA-29与circ-001971和VEGFA直接结合
        实验中采用荧光素酶报告实验验证miR-29c-3p结合circ-001971 和 VEGFA。并进一步用RIP实验验证,结果显示结果显示circ-001971、VEGFA、miR-29c- 3p与AGO2相关; 这些数据证实circ-001971和VEGFA结合miR-29c-3p以AGO2相关的方式。

6.circRNA/miR-29-3p信号调节HUVECs的管腔形成能力
        在两种细胞系中, miR-29c-3p抑制时增强VEGFA蛋白水平和管腔形成能力,敲低circ-001971降低VEGFA蛋白水平和管腔形成能力,而抑制miR-29c-3p逆转了circ-001971对VEGFA蛋白真人投注网站和管腔形成能力的影响(理解:挽救实验)。这些结果表明.circRNA/miR-29-3p轴调节VEGFA蛋白水平和HUVECs的管腔形成能力。

7.组织样本中miR-29c、 VEGFA的真人投注网站及其与circ- 001971的相关性
        肿瘤组织中,PCR结果显示miR- 29c-3p的真人投注网站降低而VEGFA的真人投注网站增强。WB和IHC结果显示肿瘤组织中VEGFA真人投注网站增强。另外,miR-29c-3p与circ- 001971和VEGFA呈负相关,而circ-001971与VEGFA呈正相关。

总 结:
1.肿瘤组织中,VEGFA真人投注网站上调,而 miR-29c-3p真人投注网站下调。
2. miR-29c-3p与circ-001971、VEGFA呈负相关关系,而circ-001971 和VEGFA呈正相关关系。
3. circ-001971/miR-29c-3p通过VEGFA调节CRC增殖、侵袭和血管生成。
4.为研究circRNA-miRNA-mRNA网络对CRC的影响提供了新的理论基础。

参考文献:

Chen C , Huang Z , Mo X , et al. The circular RNA 001971/miR-29c-3p axis modulates colorectal cancer growth, metastasis, and angiogenesis through VEGFA [J]. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2020, 39(1).

 


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