lncRNA与病毒感染的套路
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-07-06
长非编码RNA(lncRNA)参与各种生物学和病理学过程。乙型肝炎病毒(HBV)是一种具有部分双链的DNA病毒...

    长非编码RNA(lncRNA)参与各种生物学和病理学过程。乙型肝炎病毒(HBV)是一种具有部分双链的DNA病毒,可发展为慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的危险因素。最近报道表明,某些lncRNA在HBV相关疾病中起着重要作用。lncRNA与病毒感染的研究套路你晓得吗?这篇文章为您揭晓。
思维路线:

结果:
1. HBV感染诱导lncRNA HOTTIP上调
    HBV(+)HCC组织和HCC细胞中HOTTIP的水平明显升高,HBV初次感染后HOTTIP升高,而继发感染后HOTTIP升高更多。这些结果表明,HOTTIP在HBV阳性组织和细胞中上调。

2. HBV DNA聚合酶通过CREB1诱导HOTTIP表达
    将HOTTIP启动子克隆到萤光素酶报道载体(HOTTIP-LUC +)中,荧光活性因pHBV1.3的存在而增加,pHBV1.3还增加HOTTIP的mRNA水平,HBV DNA pol(DNA聚合酶)可显著增加HOTITP的mRNA水平。将HOTTIP启动子与表达不同HBV蛋白质的质粒共转染Huh7细胞,检测它们对HOTTIP表达的影响,发现HBV DNA pol确实增加HOTTIP启动子活动,其他效果不明显。推定两个CREB1结合位点存在于HOTTIP启动子区域,Hueb7细胞中CREB1的过表达激活HOTTIP启动子,突变CREB1的结合位点时,HOTTIP-Luc荧光活性被削弱。CREB1的异位表达增加Huh7细胞中HOTTIP mRNA的水平。HBV DNA pol可消除CREB1突变对HOTTIP启动子活性的促进作用。转录抑制剂Dactinomycin D处理Huh7细胞后,CREB1 mRNA的稳定性增强,提示HBV DNA pol对CREB1的上调可能是由于CREB1 mRNA稳定性增加。这些表明HBV DNA pol绑定并稳定CREB1 mRNA以促进其翻译,进而诱导HOTTIP表达。

3. HOTTIP和HBV DNA pol抑制HBV复制
    研究HOTTIP对HBV基因表达和复制的影响。萤光素酶报告基因检测表明,过表达HOTTIP抑制HBV Enh I / Xp活性,HOTTIP敲低则增加;但是,HBV SP1,Sp2和CP的活性没有明显变化。培养上清液中的HBsAg和HBeAg水平在HOTTIP过表达后减少,在HOTTIP敲低后增加。HOTTIP过表达的细胞中HBV pgRNA和总RNA减少,上清液中HBV DNA拷贝减少,DNA复制中间产物也减少。在HOTTIP敲低后效果相反。这些结果证明HBV DNA pol促进HOTTIP表达,并且HOTTIP反过来会抑制HBV复制。HBV DNA pol的过表达显著降低HBsAg和HBeAg的水平,降低pgRNA、总RNA和HBV DNA拷贝。这些表明HOTTIP和HBV DNA pol可抑制HBsAg和HBeAg的产生以及HBV基因组复制。

4. HOXA13表达与HBV复制有关
    将pHBV1.3质粒转染到Huh7细胞中,HOXA13水平升高。HOXA13敲低可提高pHBV1.3转染的Huh7中HBsAg、HBeAg的水平、HBV DNA拷贝水平。HOXA13抑制HBV Enh I / Xp活性,而敲低HOXA13则增强。HOXA13降低DNA复制中间体的水平。这些表明HOXA13抑制HBsAg、HBeAg的产生和HBV基因组复制。

5. HOXA13通过与HBV Enh I / Xp结合来介导HOTTIP对HBV复制的影响
    HOTTIP可通过促进肝细胞中HOXA13的表达发挥其功能。HOTTIP过表达导致HOXA13蛋白质和mRNA积累,敲除HOTTIP具有相反作用。探讨HOXA13促进HBV基因表达复制的机制,发现HOXA13过表达抑制HBV Enh I / Xp活性,突变HOXA13结合位点消除对HOTTIP和HOXA13对Enh I / Xp活性的刺激作用。这些证明HOXA13通过直接绑定到Enh I / Xp以介导HOTTIP对HBV病毒蛋白产生和复制。



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