miRNA介导胰腺癌化学耐药性
栏目:最新研究动态 发布时间:2020-06-30
胰腺导管腺癌(PDAC)作为最致命的胃肠道恶性肿瘤,是癌死亡的第四大原因...

    胰腺导管腺癌(PDAC)作为最致命的胃肠道恶性肿瘤,是癌死亡的第四大原因。基于吉西他滨(GEM)的化疗方案是癌症治疗的重要组成部分,但化疗抵抗是PDAC治疗的主要挑战。癌症中miRNA表达失调可能是导致改变生物过程的关键因素,包括化学抗性。今日,小编分享给大家一篇关于PDAC化学耐药性研究的文章。
技术路线:

结 果:
1. 耐GEM的PDAC真人投注平台中MiR-146a-5p异常下调,并与PDAC患者预后不良相关
    培养GEM抗性的PDAC真人投注平台系(MiaPaCa-2-GR和SW1990-GR真人投注平台),miRNA微阵列用于分析MiaPaCa-2-GR真人投注平台与它们亲代真人投注平台之间同时上调或下调的miRNA,结合数据库发现miR-146a-5p在所有PDAC-GR真人投注平台系中均下调,比亲代真人投注平台表达低,表明miR-146a-5p在调节化学抗性中有潜在作用。进一步研究发现miR-146a-5p在PDAC肿瘤中低表达,且其表达与临床病理特征无显著关系,miR-146a-5p的下调与更短的预后相关。

2. MiR-146a-5p抑制PDAC真人投注平台增殖和化学耐药性
    miR-146a-5p的过表达显著抑制PDAC真人投注平台的增殖和集落形成能力。用各种浓度的GEM处理PANC-1和SW1990真人投注平台持续48小时,发现GEM的IC50值在转染miR-146a-5p模拟物的PDAC真人投注平台中显著降低,表明miR-146a-5p增强GEM的真人投注平台毒性。抑制miR-146a-5p表达有相反效果。诱导凋亡是GEM抗肿瘤作用的关键机制,发现GEM诱导的真人投注平台凋亡比率在转染miR-146a-5p-mimic的真人投注平台中增加,而miR-146a-5p的下调抑制GEM处理导致的真人投注平台凋亡。这些结果表明miR-146a-5p不仅抑制真人投注平台增殖,而且增强GEM的真人投注平台毒性。

3. MiR-146a-5p可敏化胰腺异种移植肿瘤的化疗疗效
    建立PDAC异种移植模型,当移植小鼠出现明显的异种移植肿瘤,每周两次用miR-146a-5p和GEM治疗。miR-146a-5p agomir处理的异种移植肿瘤组织中miR-146a-5p的表达水平升高,肿瘤大小和重量显著降低,GEM治疗后进一步减少。miR-146a-5p agomir和GEM治疗真人投注平台增殖受到抑制,真人投注平台凋亡明显增加。这些结果表明,miR-146a-5p可以抑制肿瘤生长并使PDAC真人投注平台对GEM治疗敏感。

4. MiR-146a-5p靶向TRAF6的3'-UTR并抑制其表达
    通过各种数据库确定TRAF为miR-146a-5p的潜在靶标,miR-146a-5p模拟物处理的真人投注平台TRAF6表达减少,在miR-146a-5p抑制剂处理的真人投注平台中增加。萤光素酶实验确认miR-146a-5p可直接与TRAF6结合并抑制其表达。在36对PDAC肿瘤和邻近的正常组织中检查TRAF6的表达水平,发现RAF6在PDAC组织中的表达明显更高。IHC染色显示TRAF6蛋白在PDAC组织中表达增加,并与更多的阳性淋巴结、分化差、更严重TNM期相关。TRAF6的增加表达与预后较差密切相关。

5. TRAF6介导miR-146a-5p对PDAC真人投注平台的GEM抗性
    在PDAC真人投注平台中敲低或过表达TRAF6,发现沉默TRAF6降低了GEM的IC50值,并提高在PDAC真人投注平台中的真人投注平台毒性作用,而TRAF6过表达会增加IC50值,GEM诱导的真人投注平台凋亡在RAF6-敲低真人投注平台中增加。miR-146a-5p模拟物诱导的较低的IC50可被之后的TRAF6过表达所逆转,miR-146a-5p抑制剂处理的真人投注平台的高IC50值在过表达TRAF6时进一步增加,表明miR-146a-5p 对GEM的作用能被TRAF6 过表达抑制。这些结果表明miR-146a-5p通过直接调控TRAF6可使PDAC真人投注平台对GEM的化学功效敏感。

6. MiR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65 / P-gp轴负调节GEM抗性
    NF-κB p65、P-gp与耐药相关,TRAF6可作为NF-κB的分子桥和关键激活剂。研究发现miR-146a-5p过表达降低了NF-κB p65和P-gp表达水平,而这些蛋白质的水平在miR-146a-5p抑制后明显增加。同样,TRAF6敲低降低NF-κB p65和P-gp的表达水平。miR-146a-5p agomir处理的异种移植肿瘤中TRAF6,NF-κBp 65和P -gp的表达水平降低,数据分析发现TRAF6表达与NF-κBp 65(RELA)和P-gp(ABCB1)的表达呈正相关。这些结果表明miR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp轴调节PDAC真人投注平台的GEM抗性。

总 结:
    1. MiR-146a-5p可抑制PDAC真人投注平台增殖和化学耐药性;
    2. miR-146a-5p通过TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp轴调节PDAC真人投注平台的GEM抗性。



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