lncRNA HOTAIR促进真人投注平台分泌的机制研究
栏目:最新研究动态 发布时间:2019-12-11
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   有研究表明肿瘤细胞在肿瘤发生过程中释放大量传递信息的真人投注平台。而真人投注平台分泌是由某些相关分子调节的多步骤过程。lncRNA在肝细胞癌(HCC)进展中起重要作用,但是lncRNA HOTAIR在调节HCC细胞中真人投注平台分泌中的作用仍不清楚。近期发表在Molecular CancerIF10.679)杂志上的一篇文章介绍了HCC细胞中lncRNA HOTAIR促进真人投注平台分泌的机制。

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技术路线:


主要研究结果:
1HOTAIR异常表达与真人投注平台分泌相关

1A是鉴定出的与真人投注平台相关的31个编码蛋白。依据中位数将374例肝癌患者分为HOTAIR高表达和HOTAIR低表达两组,GSEA的结果显示真人投注平台分泌相关的蛋白与HOTAIR高表达相关联(图1B)。RAB35, SNAP23VAMP3的表达在肿瘤中显著上调(图1C-E)。

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2、在肝癌细胞中HOTAIR促进真人投注平台释放
透射电镜分析纯化的真人投注平台(图2A),构建过表达的HOTAIR细胞系,检测真人投注平台标志物CD63TG101的表达,结果发现过表达HOTAIR后,真人投注平台中CD63TG101表达都升高了(图2B)。NTA表明释放的真人投注平台大小约为100 nm(图2C)。过表达HOTAIR后,细胞分泌的真人投注平台也增多了。

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3HOTAIR增强了多泡体(MVBs)向质膜的转运
过表达HOTAIR导致CD63在离细胞核更远的地方分布(3A),同时也增加了CD63SNAP-23的共定位(图3B),还增加了细胞中MVB的量(图3C)。说明HOTAIR增强了多泡体(MVBs)向质膜的转运。

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4HOTAIR调控RAB35表达与定位
筛选Rab GTPases(介导MVB运输)的表达时发现,在过表达HOTAIR的细胞系中,RAB35的表达水平显著上调(图4A)。过表达HOTAIR,使RAB35染色增强,CD63RAB35的共定位增强(图4 B)。RIP实验结果显示,与对照IgG相比,Rab35抗体显著富集HOTAIR(4C)HOTAIR促进真人投注平台分泌的作用在转染HOTAIRsiRAB35之后时效了(图4D)。说明HOTAIR通过调控RAB35的表达和定位来促进MVBs的运动。

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5HOTAIR诱导VAMP3SNAP23异位
与对照相比,过表达HOTAIR诱导SNAP23向质膜扩散(图5 A),同时增加VAMP3SNAP23共定位(图5B),说明HOTAIR可以通过影响SNAP23复合物加速MVBs与质膜的融合。

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6HOTAIR通过SNAP23的磷酸化促进真人投注平台的释放
鉴于前人的研究真人投注平台释放依赖于SNAP23的磷酸化,因此用反磷酸化实验研究HOTAIR是否可以影响SNAP23的磷酸化。与阴性对照组相比,HOTAIR过表达显著增加了p-SNAP23/SNAP23的比例(6A),说明HOTAIR可以诱导SNAP23磷酸化。挽救实验表明当转染细胞与雷帕霉素(SNAP23调节抑制剂)共处理时,HOTAIR诱导SNPA23磷酸化的作用减弱(6B)。上述表明HOTAIR可以通过SNAP23的磷酸化促进真人投注平台的释放。

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