外泌体及内容物的可视化——基于全内部反射荧光的单囊泡成像测定技术
栏目:最新研究动态 发布时间:2019-07-26
一项能进行原位化学计量的技术:基于全内部反射荧光(TIRF)的单囊泡成像测定技术......

 外泌体(exosome)是一类由细胞分泌的30-150nm的小囊泡,exo在离开“母体细胞”时将带走细胞内的部分蛋白质和复杂RNA,经膜融合释放到胞外基质中,去到它想去的地方。这使得exo从默默无闻的小龙套成为研究细胞间对话(cross-talk)的大热主角之一。
目前常用的的研究手段如q-PCR虽然可以对exo内含物的含量进行研究,但并不能在单囊泡水平对内含物进行原位化学计量,也就是说无法揭示单囊泡水平的表型异质性。今天小编给大家带来的是一项能进行原位化学计量的技术:基于全内部反射荧光(TIRF)的单囊泡成像测定技术。
我们先来看一下该技术在研究肿瘤血浆exo中的应用:

首先,我们用CD63探针捕获血浆中的exo,将exo固定在盖玻片上;紧接着,加入可激活的适体探针(AAP)来检测靶向含有PTK7的exo,当遇到PTK7-exo时,APP被激活,发出荧光。这是DNA纳米装置(ABDNs)放大荧光信号,在TIRF成像系统下检测生成的ABDN即可用于定量分析。这一技术甚至可以直接观察和量化微量血浆样品(1μl)中的exo。
接下来,我们再来看一下如何用这一技术直接测定血清中外泌体内的microRNAs:首先,确定要研究的microRNA,设计与靶miRNA特异结合的DNA酶探针,用0.2 U mL -1 SLO通过可逆透化方法将DNA探针递送到exo中,当探针与靶miRNA特异结合时激发荧光,通过TIRF成像系统下检测荧光数和密度即可。

小编相信,随着各种技术的不断发展和成熟,人们对于exo的研究将更加深入和透彻。毕竟“科学技术是第一生产力”嘛!

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