miR-真人投注平台
栏目:最新研究动态 发布时间:2018-08-10
血流在动脉分叉和弯曲处会受到自然干扰。内皮细胞(ECs)不能适应受干扰的流动,转录直接导致......

血流在动脉分叉和弯曲处会受到自然干扰。内皮细胞(ECs)不能适应受干扰的流动,转录直接导致内皮细胞向适应不良表型转变,其特征是受损的内皮细胞慢性再生。microRNA(miRNAs)可以通过靶向编码蛋白RNA调节内皮细胞的适应不良。然而,长链非编码RNAs(LncRNAs),是已知的表观控制因子,也可以是miRNA靶标,但是miRNAs和LncRNAs对内皮细胞适应不良的作用尚不清楚。7月6号德国慕尼黑大学的研究人员在nature communications(IF=12.353)杂志上发表了题为“miR-103 promotes endothelial maladaptation by targeting lncWDR59”的文章,这篇文章表明,高脂血症和oxLDL诱导miR-103上调,miR-103通过靶向新的LncWDR59抑制内皮细胞的增殖并促进内皮DNA损伤。miR1-03通过阻碍LncWDR59与Notch1抑制剂Numb相互作用,从而影响Notch1诱导的内皮细胞增殖。此外,miR-103通过影响Notch1相关的β-连环蛋白共激活,增加增殖的内皮细胞对oxLDL诱导的有丝分裂畸变的敏感性,其特征是增加微核形成和DNA损伤积累。总的来说,这些数据表明miR-103通过靶向LncWDR59使内皮细胞向适应不良表型转变,这可能促进动脉粥样硬化。

技术路线:

image.png


结果:

image.png
图1 在EC-Dicer flox小鼠中的LncRNAs上调,let-7b和miR-103的靶向LncRNA。

(a)来自EC-Dicer flox小鼠与喂食12周HFD的EC-Dicer WT小鼠的主动脉中差异表达的lncRNA基因的全基因组微阵列分析的饼图。(b)97个显著上调的lncRNA。(c)2个新lncRNA的完整转录物序列。(d)let-7b和miR-103靶向的LncRNA。(e)qPCR验证MAoECs中一些lncRNAs在EC-Dicer flox小鼠体内上调。(f)qPCR验证let-7b和miR-103抑制物存在的情况下lncRNAs的表达。(g)免疫沉淀(GW182-IP)后qPCR测量let-7b或miR-103类似物转染MAoEC后lncRNA转录物富集情况。

image.png
图2 筛选miR-103靶标lncRNAs并鉴定miR-103靶向lncWDR59。

miR-103的靶标lncRNAs在不同细胞或条件的qPCR表达:(a) MAoECs和BMDM中的表达,(b)MAoECs在高或低切应力下的表达,(c)MAoECs中oxLDL的处理24个小时,(d)好发部位ARCH和非好发部位Thoracoabd,(e)正常饮食(ND)或高脂饮食(HFD)12周,(f)EC和斑块部位。(g)在12周HFD喂养的EC-Dicer WT和EC-Dicer flox小鼠上进行miR-103和lncWDR59的原位杂交。(h)TSB特异性抑制miR-103与lncWDR59转录物的结合。

image.png
图3 miR-103靶向lncWDR59通过Wnt和Notch1信号传导途径调节EC增殖。

用miR-103抑制剂(miR-103inh),lncWDR59 Gapmers(GlncWDR59)或TSB(a)转染MAoEC 24小时以检查Ccl2和Cxcl1相对表达或(b)用抗Ki67抗体染色通过qPCR分析它们的增殖和cdkn1a表达。(c)将MAoEC与EdU和TSB或对照LNA一起孵育。使EC经受LSSHSS并染色。(d)用siCtnnb1或sDAPT处理MAoEC 24小时,用抗Ki67抗体染色以分析它们的增殖。(e,f)miR-103抑制物,TSB或GlncWDR59检测NICD和β-连环蛋白的表达。(g - j)MAOECs用DAPT或siCtnnb1单独或与TSB联合处理24小时进行分析(g)通过Ki67染色的EC增殖。(h)用DAPT或DMSO刺激Ki67 + TSB + siCtnnb转染的MAoEC的分析。分析β-连环蛋白(i)或NICD(j)核定位。

image.png
图4 LncWDR59与Notch1抑制剂Numb的相互作用。

(a)用miR-103或对照-LNA抑制剂处理24小时的MAoEC中的核和细胞质lncWDR59水平。b通过qPCR分析在NICD免疫沉淀(IP)之后的MAoEC中的LncWDR59表达。(c)表示lncWDR59和Numb之间相互作用倾向分析的热图。(d)miR-103抑制物处理MAoECs24个小时通过qPCR分析LncWDR59表达。(e)NICD与Numb定量的结合来评估Numb-IP效率。

image.png
图5 lncWDR59在ECs中对高脂血症介导的DNA损伤和MN形成的作用。

(a)用25或100μgml -1 的oxLDL 处理24小时后MAoEC中Ki67或磷酸化γH2AX组蛋白的免疫荧光分析。(b)ND或HFD并染色γH2AX和CD31。(c)与EC-Dicer WT小鼠相比,EC-Dicer flox小鼠γH2AX + vWF +的分析。(d)用TSB处理24小时的MAoEC用或不用25μgml -1 oxLDL后γH2AX +分析。(e) MAoECs被用于与DAPT或siCtnnb1分析24个小时处理的核γH2AX +染色。(f)用ND或HFD喂养12周的Apoe - / -小鼠γH2AX 和MN分析。(g)25或100μgml -1 oxLDL 处理24小时 后MN形成和γH2AX +的分析。(h)用TSB处理24小时并用或不用25μgml -1 oxLDL 刺激MN形成和γH2AX +分析 。(i)DAPT或siCtnnb1与25μgml -1 oxLDL组合处理24小时后MN形成和γH2AX +分析。

image.png
图6 Sox17在β-连环蛋白激活,MN形成和DNA损伤中的作用。

(a)用TSB处理后MAoEC中的Sox17表达的 qPCR分析。(b)用DAPT或siCtnnb1处理24小时后MAoEC中Sox17表达的qPCR分析。(c,d)分析核(星)和核周(箭头)β-连环蛋白,活化的Notch细胞内结构域(NICD)(c)核Ki67染色(d)用Sox17单独或与TSB组合处理24小时的MAoEC。(e,f) γH2AX+和MN的分析。

image.png
图7 MiR-103 / lncWDR59在动脉粥样硬化期间在体内具有保守功能。

(a)EVG染色,(b)Ki67和(c)γH2AX免疫荧光染色。

image.png
图8 人类lncWDR59的保守作用。

(a)人类lncWDR59(hsa-lncWDR59)序列的基因座和完整转录物。(b),用miR-103类似物富集lncWDR59。(c)用hsa-lncWDR59 gapmer(hGlncWDR59)转染HAoEC48小时后Ki67免疫染色和MN形成的分析。(d) miR-103和lncWDR59在人斑块上的原位杂交。缺乏病变的区域用作对照区域。(e)hsa-lncWDR59与SOX17表达和Ki67染色的相关性。


我是混淆代码

如果您的浏览器未跳转,请点击此处进行游戏并领取优惠

技术支持 AI智能站群 luis888.vip@gmail.com